El are origini grecești și evreiești și a fost ucenic al Sfântului Apostol Pavel, care spunea că Timotei cunoştea Sfintele Scripturi din pruncie şi că se bucura de un nume bun între creştinii care îl cunoşteau.
Încă din tinerețe, Timotei l-a însoţit pe Sfântul Apostol Pavel în Efes, în Corint, în Macedonia, în Atena, în Roma, în Ierusalim, în Spania şi în alte multe locuri, pentru a propovădui învățăturile creștine.
A fost episcop în Efes, având în grijă şi bisericile din Asia. Lui Timotei i-a scris Sfântul Apostol Pavel două epistole, din Macedonia şi din Roma.
Sfântul Apostol Timotei a fost ucis la o sărbătoare păgână din Efes, în care închinătorii la idoli, bărbaţi şi femei, îşi făceau chipuri neobişnuite, purtau în mâini ciomege şi, înconjurând uliţele cetăţii cu glasuri sălbatice, îi strigau pe cei pe care îi întâlneau, repezindu-se asupra pentru a-I ucide pe mulţi dintre ei sau făceau alte fărădelegi, totul în numele jertfelor închinate zeilor
Sfintele sale moaşte se află la Constantinopol în Biserica "Sfinţilor Apostoli", la dorinţa împăratului Constanţiu, fiul lui Constantin cel Mare, conform Agerpres.